1.6 精子的冷凍保存r5nIVF導航

精子比胚胎能更好地耐受冷凍。精子結構相對簡單，表面積/體積比大，對水的滲透性強，很容易在含冷凍保護劑的冷凍液中達到滲透平衡。精子內主要成分是高度凝集的DNA，細胞質極少，含水分也少，不易形成冰晶。另外由于精子易于獲得，而且數量大，冷凍復蘇過程中，即使有部分損失，剩余精子通常也可以滿足治療需要。也正因為如此，各中心對精子冷凍技術的研究投入很少，多年來改進不大。雖然人們對精子冷凍保存的研究非常早，已經有近300年歷史，但直到1949年Ploge等發現甘油能夠作為冷凍保護劑以后，精液的冷凍儲存才真正實用化。20世紀60年代后，隨著精子冷凍技術的成熟，世界范圍內建成多家精子庫。r5nIVF導航

（一）精子冷凍保存的意義r5nIVF導航

用于那些取精困難的患者。預先冷凍精子可以減少取卵日當天男方的取精壓力。由于大部分提前冷凍精子的患者都能在取卵日取出新鮮的精子用于卵子受精，所以這些冷凍的精子通常僅做備份。r5nIVF導航

（1）精子庫：為不能提供精子的不育夫婦進行供精人工授精或供精體外受精治療。2001年我國衛生部出臺精子庫的相關法規，精子庫的設立要經過衛生部的審批。對于捐贈的精子，捐贈者必須滿足一定的客觀條件，而且通過冷凍技術冷凍保存6個月精子，直到捐贈者病毒篩査試驗結果為陰性，方可使用。r5nIVF導航

（2）對干擬接受他人贈卵的患者，可以冷凍接受方的男性精子，這樣在有合適供卵時直接受精，可以減少贈卵人與受卵人雙方的見面機會，更好地保證衛生部雙盲的要求，并為男性患者帶來更多的方便。r5nIVF導航

（3）對于少精、弱精者，可以采用分次射精冷凍保存后，統一復蘇后混合處理的方法進行人工授精（集精人工授精)，但以目前的實踐結果來看，多數采用這種方法的研究，人工授精成功率并沒有明顯改善。r5nIVF導航

（4）保存男性生育能力。在癌癥治療前凍存精子，由于惡性腫瘤治療方法的進步，患者預期存活期大大提高，可能存在生育要求，而腫瘤的放化療可能嚴重影響精子的數量和質量，因此對癌癥治療前的患者利用精子庫來保存男性生育能力是一種有利的生殖保險手段。對于從事影響生育力的工作（如接觸有毒物質、放射線）的男性，也可以提前將精液冷凍。r5nIVF導航

（5）手術獲取精子的保存。通過手術取精的患者常常會要求進行精子冷凍。睪丸姐織活檢取精或是經皮附睪穿刺精子抽吸的精子冷凍后，便于在治療周期中不需要再次手術取精，或者預防下次取精失敗。r5nIVF導航

（二）精子冷凍的方法r5nIVF導航

目前，精子冷凍最成熟的方法為程序冷凍法。r5nIVF導航

精子冷凍前需要進行計數，因此，所需的設備除程序冷凍儀外，還需要精子計數裝置。r5nIVF導航

精液取出液化后應該盡早進行冷凍，對精液進行冷凍處理一般在取精后1小時之內。冷凍前的精子活率及正常形態率越高，復蘇后精子的活動率越高。但是由于精液冷凍方法的不穩定性，以及大家對其重視程度不足，精子復蘇率究竟和哪些因素相關性最大并無定論。r5nIVF導航

精子冷凍也首先包含了脫水的過程，使用的冷凍液中含有的冷凍保護劑主要為甘油，也有的配方使用甘油復合制劑，添加了卵黃、枸櫞酸鈉、抗生素等物質。目前有多種市售的精子冷凍液可以選擇。甘油在精液中的最終濃度通常選用9%～10%。甘油過高時會引起精子頂體、頸部的損害以及尾部的彎曲。冷凍液原液的甘油濃度通常比終濃度高2倍。添加冷凍液原液前應該準確測定精液的量，以便確定所需的冷凍液原液量。添加原液時，應緩慢添加，邊滴邊攪拌，約1分鐘滴完。然后經過充分混勻后分裝入冷凍容器。經過脫水后的精子，細胞內滲透壓增加，但精子往往還有運動能力。r5nIVF導航

脫水后將精子裝入容器冷凍，常用的冷凍容器包括1.8ml冷凍管或麥管。1.8ml冷凍管容積較大，便于保存比較多的精液，但由于管壁較厚，植冰效果稍差，而麥管正相反，植冰效果好而容積太小,所以應該根據治療的需求和患者精液的實際情況來選擇。r5nIVF導航

在冷凍降溫過程中隨著溫度的不斷下降，細胞外液形成細小的冰晶，使細胞外液的電解質濃度增加，隨著脫水的進行，精子逐漸皺縮而在細胞內不產生或只產生少量的冰晶。其中如前所述，在-6～-5℃,需要植冰來打破溶液的過冷狀態。隨后降溫至-8℃左右可以直接進入液氮中保存。r5nIVF導航

（三）冷凍精液的復蘇r5nIVF導航

有關冷凍精液的復蘇，相關的研究并不多，復溫可以采用的方法包括室溫下空氣中復蘇，水浴復溫，有的中心將標本握在手中復溫。哪種復溫方法對精子復蘇存活率最好并沒有定論，但有的研究提示，37℃下水浴快速復蘇的精子的活率高于室溫下復蘇。理論上，快速復溫可能防止因慢速復蘇造成細胞內重結晶而損傷精子。r5nIVF導航

（孫正怡）r5nIVF導航