核心提示: 1.2 培養液的組分胚胎培養液包括如下組分:?水?無機鹽類 ?碳水化合物 ?氨基酸 ?維生素 ?核酸前體 ?螯合劑 ?抗氧化劑 ?杭生素 ?大分子物質 ?激素和生長因子?緩
1.2 培養液的組分 胚胎培養液包括如下組分: ?水 ?無機鹽類 ?碳水化合物 ?氨基酸 ?維生素 ?核酸前體 ?螯合劑 ?抗氧化劑 ?杭生素 ?大分子物質 ?激素和生長因子 ?緩沖系統 在本章節里會對每一組分對胚胎發育的影響依次進行討論。 (―)水 占培養液總體成分99% 的水是培養液的最基本的組成成分。配制培養液所用的水的純度和質量會直接影響培養液的質量和表現,進而決定在該培養液中培養的胚胎的活力和命運。比如,2細胞小鼠胚胎的發育在用經過3次蒸餾的水配制的培養液中培養效果優于用經過兩次或一次蒸餾的水配制的培養液中的培養效果,這說明,水的質量對胚胎培養是有影響的。 目前常用的制造純化水或注射用水的方法有蒸餾法、離子交換法、反滲透法、濾膜過濾法、濾膜過濾法等。如果一個生殖中心的實驗室要自行配制培養液或冷凍用液等胚胎處理液,為確保所用水的質量以避免對胚胎的不利影響,所選用的水最好是符合中國和國際藥典規定的滅菌注射用水而不是單純的純化水。關于中國、美國和歐盟藥典對純化水和注射用水的標準,包括水的來源、性質、pH、重金屬最大允許值、內毒素含量、總有機碳、電導率、微生物限度等請見表6-6。
(二)無機鹽類 胚胎培養液的無機鹽包括鈉、鉀、鈣、鎂、氯化物、磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽等,它們是維持培養液滲透壓的主要成分。 由于無機鹽離子與氨基酸、蛋白質和碳水化合物,以及無機鹽離子之間均存在相互作用,每一離子組分對胚胎發育和活力的影響并不容易闡明。如小鼠胚胎在含0.4~48mmol/L鉀離子、0~9.6mmol/L鎂離子、0.1~10.2mmol/L鈣離子及0~7.2mmol/L 磷酸鹽溶液中均可生長。倉鼠的胚胎也可以在不同濃度的鈉、鎂、鈣和鉀的環境中,從第一次卵裂或2細胞期開始發育成囊胚。但更多的研究表明,高濃度氯化鈉對小鼠囊胚培養是有害的,當將其濃度降至85mmol/L時,小鼠卵裂期胚胎可以提高mRNA和蛋白質的合成率。 培養液中的鎂離子對2細胞胚胎至囊胚的培養似乎不起關鍵作用,但鎂離子參與構成細胞間質。鈣離子被證明對桑葚胚的致密化至關重要。兩種離子除參與細胞的各種生理活動之外,還可以使細胞互相連接。目前,廣泛用于對卵裂期胚胎的植入前遺傳學診斷的培養液設計即基于這個原理。這一培養液不含有鈣、鎂離子,因而當將待進行PGD的卵裂期胚胎放入短時培養時,卵裂球之間的密切連接時以變得松散,用活檢針取出一個卵裂球時不易破壞鄰近的卵裂球。當將胚胎轉移至正常培養液中培養時,卵裂球間的連接蛋白又可以恢復正常功能使胚胎發生去致密化進而使胚胎正常發育。 |
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